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胶东在线5月20日讯(记者 栾雪 实习生 石雪)根据WHO的标准，凡婚后未避孕，有正常性生活、夫妇同居1年而未受孕者，称为不孕症(infertility)。不孕症发病率的上升让越来越多家庭选择试管婴儿来进行生命的延续。在试管婴儿的治疗过程中，有很多关键的时刻。如果错过，就可能会影响试管婴儿的成功率，甚至竹篮打水一场空。

为解开患者试管婴儿关键期如何度过的困惑，5月19日下午14：30，烟台毓璜顶医院生殖医学科庄丽丽医生联合胶东在线网站，围绕“试管婴儿关键时刻该怎样渡过”主题开展健康科普直播，为大家揭开试管婴儿神秘的面纱。

试管婴儿治疗流程主要分为药物促排卵、取卵、体外受精及胚胎移植四步，治疗过程中也有四个关键时刻。

关键时刻一：做几代？>

一代试管适应症为输卵管性不孕症、原因不明的不孕症、子宫内膜异位症、排卵障碍、免疫性不孕等。二代试管适应症为严重少弱精子、梗阻性无精子症、多次IVF授精失败、不明原因性不育症等。三代试管适应症为适用于携带遗传性疾病、遗传风险、染色体重排、不明原因反复流产的患者。试管的选择要在患者双方检查后依据医生建议选择。

关键时刻二：促排卵方案及促排卵药物>

促排卵方案包括标准长方案、早卵泡期长效长方案、拮抗剂方案、微刺激方案、自然周期方案；促排卵药物选择要依据个人的年龄、卵巢功能、体重、既往手术史与病史等因素。

关键时刻三：取卵>

取卵通常采用超声下的介入治疗，如同肌肉注射一样。一侧卵巢一般进一次针可以取完，因卵巢位置、大小、卵泡多少不一样，取卵时间会不同。怕疼的患者也可以麻醉下取卵。取卵术后病房卧床观察，无并发症方可离开。

关键时刻四：胚胎移植与术后用药>

鲜胚移植还是冻胚移植好？移植D3胚胎还是移植囊胚好？移植一枚还是移植两枚？对此庄医生也给出了答案。

鲜胚移植不适合高反应人群或获卵数多者、子宫内膜与胚胎发育不同步(Gn＜8天)者、取卵手术后感染出血者、排卵过程中孕酮值升高(＞ng/ml)者、存在未处理的输卵管积水和子宫内膜炎症等的患者

移植囊胚适用于以下三种情况：1.获卵数多，有卵巢过度刺激综合征(OHSS)风险的人。2.因各种因素(如疤痕子宫、单角子宫、身材矮小、宫颈机能不全等)需进行单胚胎移植者。3.特殊人群：如反复种植失败、反复妊娠丢失、高龄等，囊胚培养可进一步筛选胚胎，增加成功率。

什么情况只能移植一枚胚胎呢？一是患者存在子宫畸形(单角子宫、子宫纵膈等)、子宫矫形术后、疤痕子宫(剖宫产术后、子宫肌瘤或腺肌瘤剔除术后)等情况；二是患者宫颈机能不全、宫颈锥切除术后；三是三代婴儿(PGT)；四是身材矮小者(身高≤155cm，体重≤45kg)；五是既往有双胎妊娠流产、早产、妊娠期高血压疾病等不良孕产史者；五是合并严重的内科疾病(如高血压、糖尿病、肝肾功能异常等)。医生也会根据患者的具体情况，选择最适合的移植策略。

每个人的促排卵方案不同，移植后用药也不尽相同。移植后部分患者出现焦虑失眠等情况，庄医生建议，患者放松心情，过重的心理压力会影响内分泌水平，造成子宫、输卵管肌肉收缩紊乱，从而导致胚胎难以着床，直接影响试管婴儿成功率。

最后，庄医生也给出了几条暖心小贴士。胚胎移植后远离负面消息，适当进行运动，平常心对待，相信自己也相信医生，坦然面对结局才是成功的关键。

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简易优质液体菌种快速繁育 快速接种新工艺核心技术

（收费学员专用内部教材）

利用矿泉水大塑料桶

简易制作液体菌种的优势

三角瓶换大瓶简易科学最适用

供应大中小型摇床和智能定量接种器及接种枪 传授技术

简易液体菌种摇床

大型回旋式摇床

6800元(含智能定量接种器和接种枪)

中型回旋式摇床

5800元(含智能定量接种器和接种枪)

三角瓶液体菌种制作专用摇床

一、用饮水机矿泉水大塑料桶制作液体菌种的概述

用500至1000毫升三角瓶制做一级液体菌种或用小米为主料制成专用母种培养基同常规方法，将育成菌球活力强，培养时间适宜的液体母种或固体小米母种，在无菌环境下，接入饮水机大塑料桶承装的特制培养基并经过灭菌的培养液中。

然后放在大型回旋式摇床上，环境温度保持在23至25℃条件下，进行育菌培养，由于回旋式摇床启动产生偏心力，使桶内培养产生上下起伏旋转，形成正负压，使瓶内和液体培养基实现充氧、溶氧，达到培养液菌丝生长必须的综合条件，促使菌丝球快速繁生。

技术背景

食用菌生产过程中，成功与失败的关键是菌种；生产中投入最大最令人担心的也是菌种。菌种的纯度、活力、培育时间和抗杂能力，决定着生产的成败。要想实现高质量、工厂化、标准化生产，同时提高栽培效益，就必须解决目前菌种生产的落后方式。

传统的固体菌种需要多级转接，一转就是半年。生产中前怕污染，后怕老化，繁琐 复杂。由于固体菌种萌发迟缓,污染居高不下，大面积污染的地区数不胜数。菌袋菌丝参差不齐，即使是同一袋内，菌丝的菌龄上下也相差悬殊，上面的菌丝已经老 化，而下面的还没长满，出菇难以集中，产品质量差，管理费用高。

液体菌种具有固体菌种所不可比拟的优势，液体菌种具有生产周期短，菌龄短而一致,纯度高、活力强,接种简便快捷，易实行工厂化、规模化、标准化生产等优点。所以食用 菌液体菌种的生产,是人们数年以前就渴求的。

传统的发酵罐液体菌种生产时，由于液体培养基在制备时营养配比不合理，液体菌种的粘稠度不合适，导致完成整个发酵培养过程需要生产周期长，菌丝（球）大小不一致，菌种质量欠佳。

简易液体菌种生产具有纯度高、活力强、繁殖快的特点，接种到培养料内有流动性好、萌发点多，发菌迅速等特种点。

应用于生产与固体菌种和发酵罐相比有以下优点：

1、菌种生产周期短。固体种一般需25—40天，而液体种仅需3—7天。

2、接种后，萌发点多萌发点多、发菌快、出菇周期短。接种24小时菌丝布满料面，10—15天长满菌袋，一般品种15-20天左右可出菇。

3、接种方便：可移动性好，可以拿到大棚内或异地接种场地接种，解决了常规发酵罐局限性场地不能移动接菌的弊端。

4、成本低：用液体菌种接种一般每袋成本是1—3分，每人每小时可接800-1000袋以上，提高效益4—5倍。

5、便于观察菌球长势和杂菌污染情况：由于选择矿泉水塑料桶透明度好，周身通透，桶内液体清晰可见，便于观查和判断桶内菌球生长情况。

6、适宜工厂化生产。可直接用于栽培料接种进行出菇，大批量生产菌袋。为食用菌集约化、标准化生产创造了条件。因此，适宜我国国情的简易液体菌种设备的出现，必将在食用菌生产领域引发一场新的革命。

简易液体菌种具有固体（颗粒）菌种无可比拟的优势，但是简易液体菌种生产设备是近几年刚发展起来并逐渐成熟的，因此很多人对此很陌生。

二、纯净水大桶培养液体菌种具有多、快、好、省等优点

1、多：每塑料桶内可承装25市斤综合培养液，每个大型回旋式摇床可以放25个塑料桶，一次性能制作菌液625市斤，可以接种制作15000个至18000个原种或栽培种，可以接种出菇菌袋（菌棒）7500个以上，按木耳模式的插棒菌袋（16.5×38cm）可以接种12000袋至15000袋，一次性一床制作菌液多、接种的袋数多。

2、快：塑料桶中接入液体母种后，在温度适宜的条件，平菇3天即可完成育菌，黑木耳、香菇、大球盖菇、桑黄菌、姬松茸-黑皮鸡枞等液体菌种4-5天快速育成液体栽培用菌种。采用智能定量接种器，匹配相适应的接种枪，接种速度快。

3、好：塑料桶内培养液在回旋偏心力的作用下，循环起伏，起到培养液溶氧量充足，菌丝能快速繁生，且能形成高于液体发酵罐培养菌球的几万倍的菌丝片，接种时萌发点聚集的多，活力旺，适合各种食药用菌品种的熟料、半熟料、发酵料、生料栽培应用，液体菌种也可以用于红托竹荪、大球盖菇、羊肚菌、长裙竹荪、滑子蘑、黑木耳、茯苓、密环菌、萌发菌、香菇等多个品种的栽培菌种制作，具有菌丝活力强，定植蔓延生长速度快，不易污染等诸多好处。

4、省：常规液体菌种制作，要购买多台价格昂贵的发酵罐及附属设备，并且操作技术繁琐，培养时间太长，普通个体生产者接受不了，工厂化批量生产厂家也时常因一罐失误，导致所接的一万多个菌袋全部报废。运用简易液体菌种制作新工艺，投资成本低，易操作，好管理，有无食用菌基础都能学会。采用自动定量智能接种器，配备不同样式的接种枪，可以对任何菌袋（菌棒）菌瓶制作模式的接种，每人每小时可接种1000袋以上，一个家庭组合就能完成一锅的菌袋接种，强有效的减少劳动力，从而降低了整体种植成本。

该项技术制备的液体菌种可以运用本公司的先进技术进行黑木、香菇、滑子蘑、大球盖菇等多种食用菌品种，进行开放式接菌不污染，成品率高。本公司对培训学员传授该项核心技术。

综上所述：不要受传统观念束缚，不要再用固体菌种，一方面增加成本，另一方面育种时间长，慎用液体发酵罐制作液体菌种，花费了太高的代价而换回惨无人赌的恶果。运用简易液体菌种制作模式，投资少，风险小、见效快，效益大。是广大种菇业户的名智选择，成功的保障。

贵州弘宝食用菌科技有限公司，面向全国食用菌种植基地培训推广，利用简易液体菌种制作工艺，采用半熟料开放接种方式，进行平菇、秀珍菇、榆黄蘑、香菇、滑子蘑、黑木耳、大球盖菇、姬松茸、红托竹荪等多种食药用菌种植，节省燃料，节省人工，污染率极低，降低生产成本，提高种植效益。

供应大、中、小型回旋式摇床、适合三角瓶液体母种制作和大塑料桶制备原种、栽培种制作应用，供应智能定量接种器、接种枪及全套液体简易制作的菌用物资及设备。

随到随学，保障学会为止，相关业务咨询电话。

三角瓶液体母种、矿泉水大桶制作新工艺

1.液体三角瓶母种制作工艺：

所需物品设备：500毫升三角瓶（直口内径33毫米、对应透气胶塞规格33-38毫米）、磁力搅拌器、小型高压锅、小型回旋摇床等。

液体培养基配制及制作工艺：

本工艺属于生物深层发酵技术领域，具体涉及到一种液体菌种快速制作的方法。具体是液体培养基是用大米粉作为碳源、用糖作为辅助碳源， 用玉米粉作为氮源、用蛋白胨和酵母膏(粉)作为辅助氮源，用磷酸二氢钾、硫酸镁作为无机盐， 用水作为载体；用三角瓶容器作为培养容器；液体培养基经过灭菌后接种，再通过旋转摇床来制备得液体菌种。本技术的特点是利用廉价的植物 淀粉作为主要碳源和氮源,一是营养配比合理、 全面；二是制备岀来的液体培养基的粘稠度很适宜；三是培育周期短，仅需要23天的时间即可培育岀优质、活力强、菌球大小一致的液体菌种; 四是用于接种时简便快速；五是接入固体培养料时，具有流动快，易分散、发菌点多、萌发快等特点。

1.液体菌种快速制作的方法，其特征包括：液体培养基是用大米粉作为碳源、用糖作为辅助碳源，用玉米粉作为氮源、用蛋白腺和酵母膏作为辅助氮源，用磷酸二氢钾、硫 酸镁作为无机盐，用水作为载体；用玻璃容器作为培养容器；液体培养基经过灭菌后接种， 再通过旋转式摇床来制备得液体菌种；

所述的液体培养基的各种原料重量配比如下（适合常规菇耳类，不适合赤松茸、红托竹荪等土生菌）：

大米粉：16份；

糖：5份；

玉米粉：6份；

蛋白胨：4份；

酵母膏：5份；

磷酸二氢钾：1份；

硫酸镁：0. 5份；

水：1000 份；

所述的方法是通过以下步骤来实现：

(1)稀释大米粉：用100份冷水将大米粉稀释。

(2)稀释玉米粉：用100份冷水将玉米粉稀释。

(3)稀释蛋白胨：用50份5060°C的热水将蛋白腺稀释。

(4)稀释酵母膏(粉)：用50份5060°C热水将酵母膏(粉)稀释。

组料：把700份水加热至沸腾后依次加入糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、蛋白胨稀释液、 酵母膏稀释液；再将溶液加热至沸腾后同时加入大米粉稀释液和玉米粉稀释液，接着继续 将溶液加热至沸腾并持续2分钟即得液体菌种培养基。

装瓶：液体菌种培养基经冷却至5060度后即可装瓶，首先三角瓶内放一个磁力搅拌子，液体菌种培养基装入瓶量不超过瓶子容积的2/3；500毫升三角瓶装350-400毫升培养液。将分装好的三角瓶用带砂芯的硅胶塞或者用纱布包好的棉塞塞紧瓶口，然后用牛皮纸或者锡纸包好，放入高压锅或常压锅灭菌。

灭菌：液体菌种培养基经过高压锅高温、高压消毒：在1. 5公斤/cm压力、温度为 121 °C的条件下灭菌40分钟；常压消毒：在常压锅内温度达到100°C的条件下灭菌持续5小 时。

接种：在无菌环境下往液体菌种培养基接入45个点的优质试管母种；

菌种培养：液体菌种培养基接入母种后静止培养23天,菌丝萌发至34毫米时，放在磁力搅拌器上，将形成的菌丝搅拌成无数的菌丝颗粒和菌丝片，促成多萌发点优势，调整液面旋涡深1-1.5厘米，经过2小时搅拌培养后移到旋转式摇床摇上培养，温度调控在25度左右，23天即得到优质的液体母种。

另一种三角瓶母种制作配方：每三角瓶400毫升装水=8两，应加粉状液体菌种专用培养基0.016市斤=8克，葡萄糖0.008市斤=4克。

每三角瓶装水350毫升=7两，应加入专用综合培养基7克=0.014市斤，葡萄糖0.007市斤。

每次做10个三角瓶液体菌种，则需水7市斤，培养基0.14市斤，葡萄糖0.07市斤。

另一种制作方法：

一：将需要的三角瓶刷洗干净，每个三角瓶内放一粒电磁搅拌转子备用

二：将所需要配方煮至沸腾，然后用3层纱布过滤，分装三角瓶，一般情况下500毫升三角瓶加液体300到350毫升，1000毫升三角瓶加液体600毫升。

三：将分装好的三角瓶用带砂芯的硅胶塞或者用纱布包好的棉塞塞紧瓶口，然后用牛皮纸或者锡纸包好，放入高压锅灭菌。

四：液体菌种揺瓶灭菌温度为125到126摄氏度之间，时间为45分钟。在灭菌期间一定要注意开启排气阀门要缓慢，防止液体倒压出瓶外

五：灭菌结束后打开锅门，让高压锅内余热烘干棉塞和牛皮纸，然后拿到超净工作台上冷却

六：三角瓶内液体温度冷却至28度以下就可以接种了，接种方法为：首先将无菌室熏蒸灭菌，三角瓶口和瓶周身用酒精擦拭杀菌，将瓶口下方用棉花绳缠绕，然后沾上酒精点燃封口，用镊子拔去棉塞或胶塞，试管母种管口在火焰上方烧热杀菌处理，迅速拔掉棉塞，用接种铲将菌种切成米粒大小的块，在酒精火上快速的将菌种接入三角瓶内，每个三角瓶接入15到20粒菌种，三角瓶封口棉塞或胶塞过火后封口，用牛皮纸等扎封完成接种。

七:接种后，静止培养48小时，液面无杂菌的三角瓶放在回旋摇床上回旋培养，培养温度都可以设定为25摄氏度。摇床转速为140转每分钟。当揺瓶内有大菌球出现的时候，将揺瓶放在电磁摇床上打碎至絮状，然后重新放在回旋摇床160转每分钟培养，培养至菌球密度达到80%以上，揺瓶母种就培养成功了。

另一种液体菌种专用固体原种培育方法

该方法是用小米综合培养基，用三角瓶做培养容器，制作液体菌种制作专用固体培养基，其小米及辅料颗粒细小，不堵接种枪，基质营养成分高，活力强，菌丝生长旺盛，萌发点多，储存期长等诸多优点，在生产应用中表现良好的效果。

按体积比例：小米50％ 稻壳粉24 木屑粉（细颗粒状）25％ 石膏1％ 含水量60一63％。

首先将小米放在容器中，加入开水浸泡（不要用锅煮〉，待小米膨大稍有白芯时捞出，按比例加入稻壳粉和细木屑、石膏拌均，加水调湿，含水量60一63％，装入三角瓶料面350一400毫升处，中间打孔洞至瓶底，上口内壁擦干净，塞好棉塞或胶塞，用纸扎好进行高压灭菌，0.15压力持续1.5小时，常规接种培养。

摇瓶液体菌种检测方法

揺瓶种的质量直接影响到后期培养桶的制作成功与否，而揺瓶种又没有办法像大罐一样取样检测，所以判断揺瓶种是不是可以使用非常关键，具体的判断方法如下：

一看菌球：优质的揺瓶种菌球均匀，菌球表面能看见绒毛状的生长点。如果菌球形状不均匀或者菌球表面光滑无绒毛，这样的揺瓶坚决不能转接。

二看菌液：优质揺瓶种发酵结束时菌液应该是呈金黄或者透明状，菌液非常清澈透明，如果菌液有浑浊现象，坚决不要使用。

三挂壁实验：在揺瓶种接近培养培养结束前24小时，将揺瓶倾斜让菌球挂到瓶壁上面一部分，然后继续培养24小时。24小时候观察瓶壁上面菌球萌发的情况。根据萌发的形状和速度判断菌球的质量。

液体种专用母种在制作过程中液体菌种的专用母种，就是将我们需要品种的试管种经过提纯复壮，从而达到液体菌种使用的标准。在制作过程中注意一下几点：

一：所选择的母种必须年轻强壮，菌丝活性强。禁止使用老化软弱的母种。

二：一定要应用富营养的培养基配方

三：接种块要尽可能的小

四：培养过程中要严格按照品种特性所需要的温度培养，尤其禁止超温。

五：培养过程中要注意观察菌种长势，发现污染和生长异常的要随时抛弃不用。

六：各菌场取回菌种后放在5摄氏度保鲜柜内保存，使用前24小时在25度温度下活化。

塑料桶制作液体栽培菌种技术

1、液体菌种培养基合成配比

每大塑料桶25市斤水+粉状液体专用培养基250克（0.5斤）+葡萄糖125克（0.25斤）。

也可选用常规液体菌种配方，不同品种所需的营养配方各有千秋，比如大球盖菇和红托竹荪等，其菌丝生长慢，用常规配方是不可以的，购摇床的用户，本公司传授技术。

代怀价格费用

塑料桶的选择：选择透明度好，耐高温的承装矿泉水的塑料桶。塑料桶厂家电话:

封口塞的选择：选择常规棉花做塞或用瓶口相适应的透气胶塞，常规矿泉水塑料桶瓶口选用规格44一49mm带砂芯的硅胶塞，砂芯硅胶塞通氧性不好，将砂芯透气盖撤掉，用棉花塞入胶塞内空处塞满，不要过紧，要有氧气缓冲的通透性，又能过滤杂菌。干燥培养室可选用棉花做封口塞，潮湿环境用胶塞较好。

粉状液体菌种制作专用培养基的选择:购培养基的电话:

灭菌处理

高压锅0.15压力持续1.5小时，常压灭菌桶内培养液达到100度持续6一8小时。

6接菌

当矿泉水塑料桶内培养液温度降至25度以下时开始接种，接种之前要将三角瓶的揺瓶菌种放到电磁搅拌器上打成絮状。然绳后用75%酒精表面消毒备用。

无菌操作接种

接种的无菌操作环节尤为重要，可选用无菌净化车间，在超净工作台上进行无菌操作接菌，也可以在接种箱内接菌，没有净化设备的业户，可以采用火圈封口模式进行接种，具体操作如下：用铁丝做成大于塑料桶瓶口1.5－2厘米的圆圈，环形圈上缠绕棉花，然后在环形棉花上均匀沾上95％洒精，在接种前，将接种室提前熏蒸消毒杀菌处理，瓶口用75％酒精擦拭杀菌，准备好湿手巾，一人点燃火焰封口环，套在塑料桶瓶口下端2厘米处，另一人提前将三角瓶液体菌种瓶口用酒精擦拭并用酒精火焰烧热杀菌处理好，手带棉手套用消毒液浸湿，首先迅速拨掉火焰封口的塑料桶封口塞，将三角瓶在火焰上方打开瓶口，烧灼三角瓶口杀菌，将三角瓶菌液迅速倒入塑料桶内，再将塑料桶的封口塞过火杀菌后封严，用湿手巾灭掉封口火燃，扎上一次性口罩或其它封盖材料扎好，即完成接种。

接种注意事项：液体三角瓶口和塑料桶瓶口要用酒精杀菌处理好，防止开瓶口杂菌乘机而入，二人配合默契，认真、严格、准确、无误，操作快捷迅速，防止时间过长，烧焦、烧软、变形塑料瓶口，封口塞要充分过火后再封紧塑料桶口，防止封口塞携带杂菌。

塑料大桶摇床培养

将接好菌的大桶均匀放在大型回旋揺床面上，用拉筋绳捆绑固位好，启动摇床变频器按钮，起初调速稍慢点，看液面回旋高度和频率，防止液面溅到瓶塞，调整至运行平稳，回旋速度和液面起伏高度为宜。

培养温度调整到25度，勤观察菌球形成情况，当桶内培养液中菌球逐渐形成，观查培养液中菌球长势情况。

一般3一7天即可长好。可以看见，瓶里有大量基本均匀、活力旺盛的菌球；菌球形态应大小均匀、活力旺盛、毛刺明显，静置5min后菌球占菌液浓度的80%以上或不分层。菌液由前期的微浑浊变得澄清透明，多数是浅黄色或橙黄色；若变得浑浊不清，则很可能是染杂菌。到培养后期菌液的糖香味会逐渐消失，取而代之的是或有或无的菌种特有的清香味；若有臭味、酸味、霉味，则可能是染杂菌。若以上指标还不能判断菌种的质量，还可以将菌种放在20～25℃的条件下静置48h左右。若表层菌种萌发明显且无其它颜色的菌落，则多为正常；若有其它特殊颜色，则是染菌。

一般培养液前期菌液稍显浑浊，随着培养时间的延长，营养物质逐渐被利用，菌液就变得越来越澄清，污染细菌、放线菌、酵母菌的菌液则很浑浊；随着营养的被利用，溶液颜色也越来越淡，绝大多数呈淡黄色或橙黄色，但有些品种比较特殊，如：黑木耳呈青褐色，蜜环菌呈浅棕色。

贵州弘宝食用菌科技开发有限公司

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大型回旋式摇床

小型回旋式摇床